引言

　　席卷全球的新冠疫情已持續(xù)3年，隨著疫情防控常態(tài)化，新冠病毒檢測成為許多人必不可少的日常生活。據(jù)初步統(tǒng)計，自2020年以來已有54款新冠檢測試劑上市，其中不乏我們常見的抗原檢測和抗體檢測試劑。那么，對于那些“捅一捅”后使用的白色小板，你知道他們都是通過什么原理來進行檢測的嗎?

　　抗體作為生命科學領域工作者最常用的工具，因具有針對某些特定表位的高親和力、高特異性而廣泛用于多種研究，在各環(huán)節(jié)的應用中都不可或缺?？贵w是否起作用，質量是否穩(wěn)定可靠，對于科研人員來說都至關重要。

抗體的主要應用

抗原的選擇

　　不管是制備單抗還是多抗，抗原的設計與制備是最重要的一環(huán)，抗原的好壞決定著能否免疫出抗體。抗原(antigen，Ag)指所有能誘導機體發(fā)生免疫應答的物質，因此，抗原物質具備兩個重要特性：免疫原性(immunogenicity)和免疫反應性(immunoreactivity)。免疫原性(immunogenicity)的強弱很大程度上決定抗原的質量，因此抗原必須具備以下條件：

　　1、分子量

　　對于多肽或蛋白質類的抗原來說，一個抗原決定簇(epitope)，通常由6-8個氨基酸殘基組成，平均每5-10 kD才有一個表位。因此分子太小的多肽或蛋白是很難有一個表位的。通常情況下我們認為，蛋白質的免疫原性較強于其他物質。尤其是分子量大于10000的蛋白質，可能含有大量不同的抗原決定簇，具有較強的免疫原性。

　　2、外源性

　　除自身抗原外，抗原通常為從體外進入機體的非己物質，進而引起機體發(fā)生免疫，產(chǎn)生相應的抗體?？乖c機體之間的關系越遠，組織結構差異越大，異源性越強，其免疫原性越強。

　　3、結構復雜

　　蛋白質和多糖抗原，結構越復雜，免疫原性越強，反之則較弱。例如在蛋白質分子中，含有大量芳香族氨基酸(尤其酪氨酸)的蛋白質，其免疫原性較強，而以非芳香族氨基酸為主的蛋白質，其免疫原性較弱。抗原的結構復雜性是由氨基酸和單糖的類型及數(shù)量所決定的，簡單重復的物質不具有免疫原性，比如常見的淀粉、核酸、多聚Lys等，其免疫原性都較弱。

　　4、降解性好

　　作為抗原，必須是可以降解才能抗原提呈。因此，諸如塑料、不銹鋼等難降解的物質免疫原也很弱。而同樣由于機體不能降解D-氨基酸組成的蛋白或多肽，由此組成的物質免疫原性也很弱。

常用的抗原制備方式

　　1天然提純抗原

　　由機體純化的天然蛋白，由于其本身結構比較復雜且存在修飾，是很好的抗原。但由于其純化難度大，且只適合體內高表達蛋白的純化，因此具有一定的局限性。

　　2、重組蛋白抗原

　　重組蛋白抗原制備通常使用主流的五大表達系統(tǒng)：大腸桿菌表達系統(tǒng)、哺乳表達系統(tǒng)、昆蟲表達系統(tǒng)、枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)。值得注意的是，使用這五種表達系統(tǒng)制備的抗原一般來說量比較大，為了便于下游純化，往往在構建時加上融合標簽，如常用的GST、6*His、Myc、MBP、Flag、Fc等。相對于天然蛋白，重組蛋白純度較高，鑒定也較為方便，整個生產(chǎn)過程更易控制，適合大批量工業(yè)化。因此，被廣泛地應用。

　　3、人工合成抗原

　　人工合成抗原主要用于制備小分子抗體和多肽抗體，這類合成抗原都需要偶聯(lián)到蛋白質載體上才能形成大分子抗原。因此這類合成抗原還需要連在一個大的載體上以增加其免疫原性，常用的蛋白質載體有：BSA(牛血清白蛋白),RSA(兔血清白蛋白),HSA(人血清白蛋白)，OVA(卵清蛋白)，GST(谷胱甘肽S轉移酶)，KLH(Knoweyhole Limpet Hemocyanin，鑰孔戚血藍蛋白)，MAP(多價抗原肽，主要指多聚Lys)。

　　人工合成抗原主要應用于那些抗原難以提取，難以通過重組表達來實現(xiàn)的或者是想檢測某個蛋白的特定位點。多肽的合成在現(xiàn)代化工上是一個比較成熟的技術，多肽作為抗原主要難點在于多肽的設計(抗原表位的選取)。

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