A片男女色情A片免费姬媚直播,红桃视频成人A片免费,欧美不卡一区二区三区,欧美日韩精品久久久免费观看,精品人伦一区二区三区蜜桃网站

首頁 / 重組蛋白表達 / 酵母表達系統

酵母表達系統

服務簡介

畢赤酵母(Pichia pastoris)表達系統是近年來發(fā)展迅速、應用廣泛的一種真核表達系統。它是甲醇營養(yǎng)型酵母菌,有兩個乙醇氧化酶(Alcohol oxidase,AOX)編碼基因AOX1和AOX2,兩者序列相似,AOX1基因嚴格受甲醇誘導和調控。當甲醇為唯一碳源時,AOX1啟動子可被甲醇誘導,啟動乙醇氧化酶的表達,從而用甲醇進行代謝,含AOX1啟動子的質??捎脕泶龠M編碼外源蛋白的目的基因的表達。

主要優(yōu)勢:

1.含有特有的強有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子,用甲醇可嚴格地調控外源基因的表達

2.產物易分離,畢赤酵母所用發(fā)酵培養(yǎng)基十分廉價,一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇,其余為無機鹽,培養(yǎng)基中不含蛋白,有利于下游產品分離純化

3.外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定,外源基因能以高拷貝數整合到畢赤酵母基因組中,不易丟失并能夠得到高表達菌株

4.作為真核表達系統,畢赤酵母具有真核生物的亞細胞結構,具有糖基化、脂肪?;?、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能

表達菌株特點:

GS115:AOX1和AOX2基因都正常表達AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用效率高,接近于野生型,屬于甲醇快速利用型(Mut+)

KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2為AOX編碼,甲醇利用速率變慢,表現為甲醇慢利用型(Muts)

外源基因的整合方式不同會導致表達菌株的表型不同:

Table 1. 酵母菌株表型

限制酶 插入位點 GS115 表型 KM71 表型
Sa1 I/StuI HIS4 HIS+Mut+ HIS+Muts
SacI 5’AOX1 HIS+Mut+ HIS+Muts
Bg1 II 取代AOX1 HIS+Muts HIS+Muts

 

Table 2. 表達載體信息

表達類型 載體名稱 篩選標記 啟動子
胞內表達 pAO815 HIS4 AOX1
pPIC3K HIS4 AOX1
pPIC3.5K HIS4 AOX1
分泌表達 pPICZα,A,B,C bler AOX1
pPIC9K HIS4 AOX1

 

 

對于胞外表達的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽,還有以下信號肽可供選擇:

Table 3 . 信號肽序列

信號肽 蛋白序列
AlphaMF* MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA
Dse4 MSFSSNVPQLFLLLVLLTNIVSG
Exg1 MNLYLITLLFASLCSA
Scw11 MLSTILNIFILLLFIQASLQ
SAlb MKWVTFISLLFLFSSAYS

 

服務優(yōu)勢

1.具有完備的畢赤酵母表達平臺,可以根據蛋白特性或客戶需求設計不同的實驗方案

2.具有高通量篩選平臺,可以快速有效地獲得最佳表達條件

3.具有大規(guī)模發(fā)酵生產的能力

服務內容

服務內容 客戶提供 服務步驟 服務周期 交付內容
畢赤酵母表達蛋白 基因序列
載體
菌株
基因合成,密碼子優(yōu)化 2-4周

蛋白樣品

技術服務報告

亞克隆 1周
蛋白表達測試,高通量篩選 2-3周
發(fā)酵純化 1-2周

案例展示

案例1:

  蛋白A全長基因合成后亞克隆至表達載體pPICZαA,轉化畢赤酵母菌株X33,蛋白分泌表達成功(28kDa;C端6*His),產量7mg/L,純度大于90%,質檢圖如下:

酵母表達系統

蛋白A 純化質檢圖(Reduced SDS-PAGE)

 

案例2:

  蛋白B基因合成后亞克隆至表達載體pPIC3.5K分別轉化畢赤酵母菌株GS115/KM71進行胞內表達,SDS-PAGE檢測結果顯示蛋白B(糖基化后40kDa)有明顯表達,其中克隆GS115-5#(24h,0.5%甲醇),GS115-2#(48h,1%甲醇),GS115-3#(48h,1%甲醇)都能成功表達目的蛋白。

酵母表達系統

蛋白 B 表達測試圖(Reduced SDS-PAGE)

久久精品无码一区三区 | 风韵丰满熟妇啪啪区老熟熟女 | 国产成人做爰A片免费胖人 鲁鲁鲁A片1级毛片免费看 | 精品久久久久久久久久 | 丰满熟女人妻大乳邻居 | 日本人妻系列中文字幕 | 成人无码区免费A片视频野外 | 国产一级毛片一级A片酒瓶 五十老熟妇乱子伦免费章节 | 欧美性猛交XXXXX无码婷 | 一区二区三区无码成人无码 | 蜜臀色欲AV无码人妻一区 | 免费 无码 国产在线 | 亚洲无码视频在线播放 | 国产极品黑丝美女裸体被操免费网站 | 国产一区二区在线视频 | 美女裸体视频久久直播 | 国产又粗又爽又大视频 | 免费黃色三級片在线观看18 | 成人精品视频99在线观看免费 | 久久一级毛片内射人妖 | 久久成人无码国产免费播放 | 樱桃免费人成网站www | 亚洲熟妇AV日韩熟妇在线 | 午夜理理伦A片在线播放 | 国产又黑又硬又爽的视频 | 特级婬片一级A片粉色视频 真实的国产乱XX熟妇免费 | 国产高清标清无码av | 黄色无码在线观看快操我 | 一夲道人妻熟女AⅤ深 | 亚洲涩情91日韩一区二区 | 窝窝人体色WWW聚色窝 | 一本大道东京热av无码 | 欧美毛片无码又大又粗蜜桃 | wwyw913国产成人精品 | 污黄网站在线播放观看视频 | 午夜肉体高潮免费毛片 | AAAAAAAAA特黄少妇 | 无码精品蜜桃无套内谢的新婚少 | 日韩人妻无码一区二区 | 欧美日韩一区二区在线 | 免费又黄又粗又爽少妇A片视频 |