納米抗體作為一種廣泛使用的小分子抗體,因為其體積小、特異性強、穩(wěn)定性好等一系列特點,使得其在診斷和臨床中都有著廣泛的使用。有些時候,我們會根據(jù)客戶的需求來設(shè)計相應(yīng)的納米抗體產(chǎn)品,以滿足可以在抗體某些特性方面的需求,這類抗體我們通常稱之為納米抗體定制服務(wù)。那么,如何獲得高質(zhì)量定制型納米抗體呢?
我知道,納米抗體的表面大概有10個氨基酸與人的不同,VHH中有4個突變氨基酸增加了VHH的水溶性,所以,我們可以通過對VH序列進行優(yōu)化,以達(dá)到納米抗體人源化的目的。同時,針對特異性靶點設(shè)計,對納米抗體進行相應(yīng)的設(shè)計,以達(dá)到納米抗體實現(xiàn)相關(guān)功能的目的。其中包括抗原檢測、羊駝免疫、采血、效價檢測、納米抗體噬菌體庫構(gòu)建以及淘選等一系列方法,實現(xiàn)表達(dá)、檢測的一站式服務(wù)。其過程如下:
1、靶點免疫羊駝。通過四輪免疫之后,進行采血并從其中提取PBMC,通過所提取的mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,并擴增獲得VHH可變片段;
2、羊駝納米抗體庫構(gòu)建。通過獲得的VHH可變區(qū)植入到噬菌體中,通過噬菌體展示,獲得庫容為8.76*10^9的納米抗體庫;
3.、納米抗體庫淘選及篩選。通過靶點蛋白對構(gòu)建的羊駝納米抗體庫進行三輪挑選后,排除重復(fù)序列,篩選出7條不同的抗體序列,并將這些抗體徐磊注入到可溶性VHH抗體蛋白中,進行再次驗證;
總的來說,通過如上一系列的操作,不僅能獲得純度更高的納米抗體庫,也能獲得特異性更好的納米抗體。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供納米抗體定制服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎前來咨詢。普健生物還提供現(xiàn)下各種主流抗體制備產(chǎn)品,比如單B細(xì)胞抗體制備,歡迎咨詢。