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畢赤酵母表達(dá)-如何對酵母進(jìn)行保存和培養(yǎng)?

發(fā)表時間:2023-03-28 訪問次數(shù):2296

  畢赤酵母表達(dá)是原核表達(dá)中最常用的方法之一,因為其遺傳背景清晰、表達(dá)安全、制備成本低等優(yōu)點,使得在很多項目上都會優(yōu)先考慮。但是,如何讓這些耗材產(chǎn)生最大價值,那就是我們保存和培養(yǎng)的問題了。為什么大公司在成本上要比小公司更低?因除了因為技術(shù)和儀器方面的原因外,對耗材的保存和培養(yǎng)也是很大的一個方面。

  1、計算好酵母的倍增時間

  據(jù)生物學(xué)統(tǒng)計,酵母的生長分裂會隨著一定的曲線來變化,通常一OD值來繪制。一般來說,酵母分裂曲線主要分為三個時期:延滯期、對數(shù)生長期以及穩(wěn)定期,在對數(shù)期時,細(xì)胞分裂旺盛且細(xì)胞數(shù)目倍增。這個時候,我們需要主要補(bǔ)充營養(yǎng),一旦營養(yǎng)耗盡,細(xì)胞分裂減緩,則會進(jìn)入穩(wěn)定期。所以,了解本增時間,能夠很好地讓我們安排實驗進(jìn)程;

  2、制備培養(yǎng)基

  了解好OD圖后,我們就需要進(jìn)行酵母菌的培養(yǎng)工作了。酵母的主要糧食是:酵母提取物(去除細(xì)胞壁的細(xì)胞成分)、蛋白胨以及糖分。培養(yǎng)基則是將酵母提取物和蛋白胨溶解于水中之后,通過高壓滅菌后,倒入到平板中,凝固后即是我們所需的培養(yǎng)基;

  3、酵母的培養(yǎng)

  將酵母細(xì)胞種到小體積的培養(yǎng)基中,并在30度的搖床或旋轉(zhuǎn)器上培養(yǎng)48小時。當(dāng)然了,對于大規(guī)模培養(yǎng)如上的方式就不適合了,需要先確定酵母培養(yǎng)物的OD值,然后將其稀釋到起始OD值的0.1-0.2倍,然后再放到30度搖床上培養(yǎng)到所要的OD值;

  4、酵母的存儲

  平板培養(yǎng)可將培養(yǎng)基放置于4度環(huán)境下保存3個月,如果要得到新鮮培養(yǎng)物,則需要在新鮮培養(yǎng)基上重新規(guī)劃細(xì)胞。對于需要長期保存的酵母菌來說,可將其分別培養(yǎng)在不同的甘油管中,冷凍保存。一般來說,-80度環(huán)境下可以保存幾年;

  酵母的健康可以或直接關(guān)系到我們后期實驗的結(jié)果,以及能否表達(dá)出我們想要的蛋白產(chǎn)品。如果這些工作做好了,不僅能更好地滿足我們的實驗需求,而且能夠在極大程度上降低實驗成本。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供酵母蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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