穩(wěn)定細胞系也叫穩(wěn)定細胞表達系，是一種通過將目標基因整合到宿主細胞中后傳代，保證細胞可以穩(wěn)定表達的一種細胞表達系統(tǒng)。就目前來說，穩(wěn)定細胞系構(gòu)建的方法主要有三種：慢病毒感染細胞、轉(zhuǎn)座子介導的穩(wěn)定細胞系構(gòu)建以及基因敲入法。今天，普健生物就和大家具體聊聊這三種穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建方法以及相應問題解析。

　　1、慢病毒感染

　　我們知道，慢病毒技術(shù)可以感染絕大多數(shù)的細胞，而且病毒包裝技術(shù)也是非常的成熟，可以說是穩(wěn)定細胞系的首選系統(tǒng)。當然了，慢病毒技術(shù)也有著一定的不足之處，比如慢病毒包裝容量有限制，對于那些轉(zhuǎn)錄區(qū)域較長的基因來說，其有著極大的局限性。而且慢病毒為逆轉(zhuǎn)錄病毒，對于部分的基因翻譯有著一定的影響;

　　2、轉(zhuǎn)座子介導的穩(wěn)定細胞株構(gòu)建

　　也叫跳躍基因，通過剪切和粘貼來實現(xiàn)DNA片段的高效轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)座子其實就是通過編碼轉(zhuǎn)座酶，將轉(zhuǎn)座酶基因在基因序列上進行整合;

　　3、基因敲入

　　采用基因技術(shù)對目的基因進行定點敲入，依靠細胞自身的修復機制完成;

　　穩(wěn)定細胞系構(gòu)建中的常見問題：

　　1、穩(wěn)定細胞系構(gòu)建需要進行密碼子優(yōu)化嗎?

　　對于不同的基因序列來說，因為其密碼子的簡易性以及種類、數(shù)量上面的察覺，想要構(gòu)建的穩(wěn)定細胞系長期穩(wěn)定的表達，密碼子優(yōu)化是非常必要的;

　　2、如何選擇合適的啟動子?

　　對于不同的制備需求，我們需要設定特定的啟動子。比如CMV啟動子除了在干細胞外，其他大多數(shù)細胞類型中都可以得到較高活性表達;懸浮細胞中采用SFFV啟動子會獲得更高的表達活性等;

　　當然了，對于穩(wěn)定表達系的構(gòu)建來說，會遇到的問題非常的多，很多時候，即便我們嚴格按照制備方式來執(zhí)行也依然可能會出現(xiàn)問題。因為，對于大部分的人來說，穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建本就是一個龐大的過程，任何一個小問題都可能造成構(gòu)建的失敗。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細胞系構(gòu)建服務，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。