在生物技術發(fā)展的今天,蛋白表達在科學研究以及臨床治療中起著非常重要的作用。而在基因技術發(fā)展的今天,蛋白的需求日益增加,大腸桿菌表達系統(tǒng)因為其遺傳背景清晰、成本低以及生長迅速的優(yōu)勢,使得其成為重組蛋白表達的首選。
什么是高通量蛋白表達技術?
高通量蛋白表達技術其實就是一種能夠實現大規(guī)模、高效的制備蛋白的技術,可以通過不同的方法來實現目標蛋白的表達。
高通量蛋白表達的步驟有哪些?
1、目的基因制備
作為蛋白表達,基因制備是第一步。目的基因的提取方法有很多,傳統(tǒng)的方法主要是通過從cDNA文庫中提取。但是,這種方法存在一定的局限性,費時費力,而且難以添加融合標簽?,F階段常用的方法主要采用PCR技術,設計好引物后,即可在PCR儀中完成目的基因的提取;
2、高通量表達系統(tǒng)構建
和傳統(tǒng)的蛋白表達系統(tǒng)構建相似,高通量蛋白表達系統(tǒng)的構建沒有特別大的改動,只是說在一些細節(jié)方面有著一定的不同。比如在目的基因轉錄和表達之前需要添加融合標簽,以便于提升其表達效率;
3、菌株培養(yǎng)
在表達系統(tǒng)構建成功后(一般來說,我們會選擇大腸桿菌菌株來進行表達),而后選擇出合適的菌株。當然了,對于大腸桿菌的培養(yǎng)來說,我們盡量選擇分批培養(yǎng),這樣才更加有利于菌株的控制;
4、高通量蛋白表達及純化
采用高通量的平臺,能夠實現迅速地進行基因克隆、挑選菌落、質粒分離、蛋白表達以及蛋白純化等操作。當然了,雖然說這個平臺的構建相對困難,但是,對于那些復雜的分子實驗來說,往往能提供極大的便利;
采用大腸桿菌表達系統(tǒng)來實現高通量重組蛋白的表達,能夠在極大程度上推進蛋白的表達進程。雖然說在其技術水平上有著一定的要求,但是隨著技術的不斷優(yōu)化和創(chuàng)新,能夠讓其更加高效且可靠的進行蛋白表達。