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Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)案例

發(fā)表時(shí)間:2022-10-26 訪問(wèn)次數(shù):3915

  一、概述

  兔單抗與傳統(tǒng)的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識(shí)別功能。由于兔骨髓瘤細(xì)胞株受專(zhuān)利保護(hù),無(wú)法利用雜交瘤技術(shù)開(kāi)發(fā)兔單抗,普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫(kù)技術(shù)平臺(tái)以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)平臺(tái)。

  單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)是近年來(lái)新發(fā)展的一類(lèi)快速制備單克隆抗體的技術(shù),是根據(jù)每一個(gè)B細(xì)胞只含有一個(gè)功能性重鏈可變區(qū)DNA序列和一個(gè)輕鏈可變區(qū)DNA序列,以及每一個(gè)B細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性,從免疫動(dòng)物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細(xì)胞,通過(guò)單細(xì)胞PCR技術(shù)從分泌抗體的單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增IgG重鏈和輕鏈可變區(qū)基因,然后在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并獲得具有生物活性的單克隆抗體。

Xten??Mab?Single?B

圖1. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)流程

 

  二、服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)項(xiàng)目 客戶提供 服務(wù)內(nèi)容 服務(wù)周期 交付內(nèi)容
XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發(fā) 抗原序列

抗原制備

動(dòng)物免疫

脾細(xì)胞分離及陽(yáng)性B細(xì)胞篩選

陽(yáng)性克隆抗體可變區(qū)擴(kuò)增及測(cè)序分析

重組抗體表達(dá)及純化

12周

100µg/株單抗

pUC質(zhì)粒

3株最優(yōu)的抗體序列

技術(shù)服務(wù)報(bào)告

 

  案例展示:

  利用兔單B 抗體技術(shù)開(kāi)發(fā)Anti-human CD86 兔單抗。選取血清效價(jià)大于128K 的兔子,分離PBMC細(xì)胞進(jìn)行流式分選, 獲得human CD86抗原特異性B細(xì)胞鋪板。

兔單B抗體開(kāi)發(fā)

圖1 兔單B 細(xì)胞流式分選結(jié)果

  使用普健生物XtenCHO高密度瞬轉(zhuǎn)表達(dá)系統(tǒng),體外重組表達(dá)部分陽(yáng)性克隆抗體,純化后進(jìn)行功能驗(yàn)證。

兔單B抗體

圖2 兔單抗重組表達(dá)分析

  純化后的抗體進(jìn)行IF及內(nèi)源WB 驗(yàn)證。IF結(jié)果顯示抗體靈敏度高,抗原定位正確;內(nèi)源WB 結(jié)果顯示,主帶明顯,無(wú)非特異性結(jié)合條帶。

兔單B抗體

圖3 Anti-human CD86 兔單抗IF 檢測(cè)結(jié)果

RAJI細(xì)胞,一抗1:50,二抗1:50, 曝光時(shí)間30ms

兔單B抗體技術(shù)

圖4 Anti-human CD86 兔單抗內(nèi)源WB分析

Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.

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