在單克隆抗體制備的過程中，雜交瘤細(xì)胞的制備可謂重中之重，它的重要性自然不言而喻。但是，雜交瘤細(xì)胞的篩選則關(guān)系到我們產(chǎn)生蛋白的質(zhì)量以及相關(guān)成本問題。在單克隆抗體制備的過程中，我們需要進(jìn)行兩次雜交瘤細(xì)胞的篩選，方法各不相同。下面，普健生物就和大家具體聊聊。

　　第一次篩選：

　　淋巴B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞融合后即產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，之后的選擇性培養(yǎng)可謂第一次篩選成功與否的關(guān)鍵。一般我們會選擇HAT培養(yǎng)液進(jìn)行普通細(xì)胞的培養(yǎng)，一般采用兩條途徑：

　　1、生物合成途徑(D途徑)。通過氨基酸和其他小分子融合成的原料來供應(yīng)DNA分子的合成，其中也算作為輔酶參與這個過程，氨基蝶呤則會阻斷DNA合成，這個過程也就是我們常說的D途徑;

　　2、應(yīng)急途徑(S途徑)。利用次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸酐轉(zhuǎn)移酶和胸腺嘧啶核糖核苷酸催化黃嘌呤和胸腺嘧啶合成相應(yīng)的核苷酸;

　　未融合的細(xì)胞在D途徑中會被氨基蝶呤阻斷，會因為缺乏繁殖能力而死亡;在S途徑中會因為自身不具備S途徑而死亡;

　　第二次篩選：

　　一般采用有限稀釋克隆下?lián)艿姆椒?，將?xì)胞多倍稀釋后接種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，其上清液可與特定抗原結(jié)合的標(biāo)記為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞需要再次進(jìn)行有限稀釋操作，3-4次后，即可確認(rèn)其中的細(xì)胞為單克隆抗體。一般來說，第二次篩選的過程也是一個鑒定的過程。

　　總的來說，雜交瘤細(xì)胞的篩選需要進(jìn)行4-5次，這樣才能保證制備出來的細(xì)胞是合格的細(xì)胞，通過培養(yǎng)，產(chǎn)生的單克隆抗體才是我們需要的。但是這種方式制備出來的抗體因為外部條件的變化，會導(dǎo)致不同批次生產(chǎn)出來的抗體存在著一定的差異。所以，如果需要多次生產(chǎn)同樣的抗體的話，我們需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來進(jìn)行制備。更多有關(guān)單克隆抗體制備方面的知識，敬請關(guān)注武漢普健生物。