在我們進(jìn)行相應(yīng)的蛋白制備工作時(shí)，表達(dá)成功可以說(shuō)是至關(guān)重要的，但是一些細(xì)節(jié)方面的工作如果做得好的話(huà)，下游實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用起來(lái)會(huì)變得更方便。不僅僅能提升蛋白的水溶性，而且可以在極大程度上節(jié)約時(shí)間。具體操作，普健生物在下面和大家一一道來(lái)。

　　選擇正確的標(biāo)簽可以說(shuō)是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)，因?yàn)楹线m的標(biāo)簽不僅能幫我們獲得可溶性蛋白，而且能夠方便我們純化的方案，且不會(huì)對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)造成影響。在這里，我們唯一需要擔(dān)心的事情就是那個(gè)標(biāo)簽有助于目標(biāo)蛋白的溶解、表達(dá)及純化，因?yàn)闃?biāo)簽本身是可以切除的，所以，不用擔(dān)心它會(huì)干擾到蛋白。

　　硬性蛋白可溶性的三個(gè)關(guān)鍵參數(shù)：

　　IPTG濃度

　　在不同濃度下，蛋白的特性是不一樣的。但是我們需要注意，不要改變細(xì)胞中蛋白的折疊功能。在日常實(shí)驗(yàn)中，我們可以考慮多嘗試幾個(gè)不同的濃度，選擇一個(gè)最高可溶性蛋白的產(chǎn)量;

　　溫度

　　偶爾我們?cè)?7度的典型溫度下，通過(guò)生長(zhǎng)和誘導(dǎo)分離的方式來(lái)分離蛋白。當(dāng)然了，我們也可以試試在較低溫度下進(jìn)行增強(qiáng)，比如嘗試30度、25度、18度等溫度下進(jìn)行誘導(dǎo);

　　誘導(dǎo)時(shí)間

　　誘導(dǎo)時(shí)間并不是說(shuō)越長(zhǎng)越好，因?yàn)樗拗骷?xì)胞會(huì)對(duì)蛋白會(huì)造成一定的降解，毒蛋白更甚。所以，在誘導(dǎo)期間，我們需要隔幾個(gè)小時(shí)進(jìn)行取樣，并檢測(cè)蛋白的表達(dá)情況。一般來(lái)說(shuō)，37度時(shí)4小時(shí)最佳，30度5-6小時(shí)最佳，25度情況下可以允許過(guò)夜;

　　當(dāng)然了，在正式投入使用之前，我們可以對(duì)其進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)各種不同的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)試，選擇一種最合適的方式來(lái)投入到后期的實(shí)驗(yàn)中。當(dāng)各種方法都無(wú)法達(dá)到預(yù)期時(shí)，我們可以考慮只表達(dá)一部分蛋白，或者選擇不同的表達(dá)系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行表達(dá)，最后甚至可以考慮采用調(diào)整各種變性條件下的純化?？傊瑹o(wú)論用什么辦法，達(dá)到自己的要求即可。更多蛋白表達(dá)方面的知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注普健生物。