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為什么在進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建時(shí)會(huì)這么困難?

發(fā)表時(shí)間:2024-04-30 訪問次數(shù):730

  穩(wěn)定細(xì)胞株是一種用于大量且穩(wěn)定表達(dá)蛋白的一種方式,不僅可以表達(dá)蛋白,而且還能進(jìn)行相關(guān)藥物篩選以及基因表達(dá),使用范圍非常的廣泛。但是,對于很多企業(yè)來說,都不會(huì)選擇通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來表達(dá)蛋白,因?yàn)閷τ谒麄儊碚f,穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建非常的困難,性價(jià)比相對較低。為什么穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建這么困難呢?下面,普健生物和大家具體聊聊。

為什么在進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建時(shí)會(huì)這么困難?

  我們知道,外源基因的表達(dá)主要采用兩種方式,一種是瞬時(shí)表達(dá),另外一種是穩(wěn)定表達(dá)。

  瞬時(shí)表達(dá):將外源DNA克隆到質(zhì)粒中,而非將其整合到宿主細(xì)胞的染色體中。瞬時(shí)表達(dá)能夠迅速實(shí)現(xiàn)蛋白的表達(dá),但是也只能持續(xù)幾天。瞬時(shí)表達(dá)的穩(wěn)定性相對較差,而且在不同實(shí)驗(yàn)中差異性較大,且無法長久;

  穩(wěn)定表達(dá):直接將外源DNA整合到宿主細(xì)胞的染色體中,通過細(xì)胞篩選的方式,實(shí)現(xiàn)宿主細(xì)胞長期表達(dá)目的蛋白的方式;

  但是,問題出現(xiàn)了。想要將外源基因整合到宿主細(xì)胞的染色體中相對困難,成功率非常的低,通常會(huì)發(fā)生隨機(jī)整合,表達(dá)水平會(huì)受到整合位置、周圍染色體原件等因素的影響。所以,如果我們想要獲得能夠進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá),則需要進(jìn)行大量的篩選工作。

  什么情況下需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株?

  1、對于那些需要長期研究的目標(biāo)細(xì)胞來說,可以通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來實(shí)現(xiàn);

  2、對于一些半衰期極長,盡可以通過RNA干擾卻無法表達(dá)的蛋白,只有通過穩(wěn)定細(xì)胞株來實(shí)現(xiàn);

  3、對于那些無法進(jìn)行精確表達(dá)的細(xì)胞;

  4、需要用到細(xì)胞的;

  穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建要點(diǎn)有哪些?

  穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建是一個(gè)長期的過程,所以,從質(zhì)粒構(gòu)建、病毒包裝、細(xì)胞感染以到細(xì)胞篩選等過程,都需要引起注意,因?yàn)槿魏我粋€(gè)細(xì)節(jié)方面的錯(cuò)誤都可能造成耗時(shí)大半年的項(xiàng)目付諸流水。

  穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建能夠在極大程度上解決蛋白穩(wěn)定表達(dá)的問題,對于一些需要長期制備或者需要進(jìn)行細(xì)胞的長期研究時(shí),都可以通過穩(wěn)定細(xì)胞株來解決。當(dāng)然了,對于穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建,除了需要相關(guān)技術(shù)支持外,還需要有精細(xì)且細(xì)節(jié)方面的操作,只有在各個(gè)方面做好了,才能在更大程度上保證其構(gòu)建成功。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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