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穩(wěn)定細胞株構(gòu)建過程中的一些常見問題盤點

發(fā)表時間:2024-01-22 訪問次數(shù):670

  為了能夠?qū)崿F(xiàn)蛋白的大規(guī)模生產(chǎn),我們通常會選擇通過構(gòu)建穩(wěn)定細胞株的方式來實現(xiàn)。當然了,穩(wěn)定細胞株構(gòu)建的過程相對來說復(fù)雜,而且中間會因為很多原因造成構(gòu)建失敗。有鑒于此,普健生物專業(yè)為大家盤點一下有關(guān)穩(wěn)定細胞株構(gòu)建過程中的常見問題。

穩(wěn)定細胞株構(gòu)建過程中的一些常見問題盤點

  1、是否需要進行密碼子優(yōu)化

  因為密碼子種類多樣、數(shù)量差異等問題,所以,密碼子優(yōu)化對穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建有著很大的作用,能夠大幅度提高目標蛋白的表達量;

  2、如何選擇合適的啟動子

  對于大部分的啟動子來說,使用得當都能在大多數(shù)細胞中獲得高表達性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都屬于強啟動子,可以作為穩(wěn)定細胞株的啟動子;

  3、穩(wěn)定細胞系培養(yǎng)體系

  構(gòu)建穩(wěn)定細胞系時一般建議使用版抗性篩選濃度來維持細胞生長,可添加葡萄糖來調(diào)節(jié)細胞代謝水平,維持細胞增殖;

  4、標簽是放N端還是C端

  這個需要結(jié)合實際情況來選擇,如果信號肽在N端,則將標簽放在C端;蛋白較小也放C端,純化中需要酶切標簽則推薦放N端;

  5、是否需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)敲除的細胞系

  一般來說,我們不建議敲除元件穩(wěn)定持續(xù)的表達在細胞中,因為這個操作會在很大程度上影響細胞的狀態(tài);

  穩(wěn)定細胞株構(gòu)建一般使用在蛋白大規(guī)模生產(chǎn)時,在構(gòu)建過程中需要注意的問題也不止如上幾樣,各個方面的細節(jié)操作也需要引起注意,而且需要有相應(yīng)的技術(shù)支持。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細胞株構(gòu)建服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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