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穩(wěn)定細胞株篩選各過程中的一些注意事項盤點

發(fā)表時間:2023-08-02 訪問次數(shù):758

  前面我們和大家簡單介紹了一下有關穩(wěn)定細胞株篩選的步驟,讓大家對其有了一定的了解,那么,是不是就可以直接開始實驗了呢?答案是否定的。在穩(wěn)定細胞株篩選的過程中不僅有很多細節(jié)操作問題,還有很多注意事項,稍不注意,就可能造成實驗的失敗。有鑒于此,普健生物今天在這里和大家具體聊聊其注意事項問題。

  1、篩選前的準備

  篩選前我們需要確定藥物篩選的相關濃度。對于不同的細胞來說,其對藥物的敏感度是各不相同的,需要在細胞能夠承受的濃度范圍內,否則,很容易造成細胞表達低甚至死亡的情況;

  2、篩選過程中的注意事項

  篩選時間:一般在轉染后48小時后進行,而對于慢病毒來說加藥時間一般在72小時;

  空白對照:在加藥篩選時,需要提前設置好空白對照,全程對比細胞的變化情況;

  換液操作:當細胞死亡達到一定的程度后,需要及時換液,以避免有害物質造成細胞的死亡;

  3、克隆篩選過程中的注意事項

  在進行單克隆篩選的時候,如果有熒光標記,則盡量選擇那些帶有熒光較強的細胞;如果質粒不帶熒光標記,則只能進行盲挑。

  當然了,無論是否帶有熒光標記,都需要對其進行驗證,而且盡量多挑幾個來進行克隆,以保證成功率;

  當然了,如上所述也只是注意事項中的一部分,對于不同實驗的不同需求來說,注意事項也是各種各樣的,比如基礎的溫度、PH值等等,這些都需要提前了解好,而后根據(jù)相應的需求來配置相應的環(huán)境,這樣才能有效提升實驗的成功率。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細胞株篩選服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。

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