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穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建方法及其構(gòu)建注意要點

發(fā)表時間:2023-04-10 訪問次數(shù):870

  在生物實驗中,我們在很多時候都要用到穩(wěn)定細胞株構(gòu)建技術(shù),但是如果采用質(zhì)粒建系的話,不僅時間長,而且成功率低,可能耗時半年都不一定能得到想要的結(jié)果。那么,怎么才能穩(wěn)定構(gòu)建細胞系,并獲得較好的結(jié)果呢?今天,普健生物就和大家具體聊聊。

  穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,其實是相對瞬時轉(zhuǎn)染來說的,就是將進入細胞中的質(zhì)粒整合到細胞基因組中去,讓其隨著細胞的分類而不斷遺傳下去的方式。而瞬時轉(zhuǎn)染則會因為整合基因的概率非常低而以游離的形式存在。

  什么時候需要使用到穩(wěn)定細胞株構(gòu)建呢?

  1、需長期研究目的蛋白時。對于那些需要長期研究的目的蛋白來說,不能存在太大的批次差,否則會造成實驗結(jié)果不準的情況,這個時候就需要構(gòu)建細胞株來保證蛋白批次相同;

  2、目的蛋白半衰期長時。對于一些半衰期較長的目的蛋白來說,瞬時RNA只能達到干擾表達的目的,卻無法去除蛋白,這個還是可以用穩(wěn)定細胞株來實現(xiàn);

  3、需極高拷貝數(shù)表達時。目的蛋白需要極高的拷貝數(shù)時,往往會因為一些認為的因素而導致結(jié)果不準確的情況,這個時候,就需要構(gòu)建穩(wěn)定細胞株來幫助實驗研究;

  4、需用到誘導表達系時。主要針對一些致死基因或時空表達的情況;

  5、需要使用到細胞時。比如裸鼠成瘤等atagenix;

  構(gòu)建穩(wěn)定細胞株有哪些要點?

  我們知道,穩(wěn)定細胞株構(gòu)建是一個長期的過程,無論是質(zhì)粒構(gòu)建,還是慢病毒包裝,以及細胞轉(zhuǎn)染和篩選,任何一個步驟都是至關(guān)重要的。甚至有的時候一個細胞株的構(gòu)建就需要耗費半年的時間,只要一個步驟出錯,就會造成實驗的失敗。所以,除了注意各個步驟外,我們還需要做好如下三點:

  1、優(yōu)良的細胞種子。

  2、選擇形狀穩(wěn)定的細胞。

  3、選擇活力無損的細胞。

  總的來說,穩(wěn)定細胞株不僅能降低成本,能夠減少污染,而且能夠有效地避免一些認為原因造成的影響,提升實驗結(jié)果精確度。雖然說現(xiàn)階段的穩(wěn)定細胞株構(gòu)建有著一定的局限性,但是,相信技術(shù)的發(fā)展下,未來一定能夠解決這些問題。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細胞株構(gòu)建服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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