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蛋白純化的操作原理及其注意事項(xiàng)有哪些?

發(fā)表時(shí)間:2023-08-25 訪問(wèn)次數(shù):714

  蛋白制備完成后,我們需要對(duì)其進(jìn)行純化以便于提升其各方面的性質(zhì)。那么,如何進(jìn)行蛋白純化呢?一般來(lái)說(shuō),通過(guò)分子的大小、蛋白性質(zhì)以及外部環(huán)境等方面的不同,對(duì)蛋白進(jìn)行純化。下面,普健生物具體和大家聊聊有關(guān)抗體純化的常用原理。

  1、分子大小

  對(duì)于不同的蛋白來(lái)說(shuō),其分子大小也是各不相同的。所以,我們可以結(jié)合不同分子的大小,通過(guò)透析、超濾、離心分離等一系列的手段進(jìn)行蛋白純化操作;

  2、分子形狀

  蛋白分子在離心通過(guò)溶液時(shí),在通過(guò)膜、凝膠等填充材料時(shí),都會(huì)受到分子影響。所以,對(duì)于不同形狀的蛋白分子來(lái)說(shuō),可以利用這個(gè)方式來(lái)進(jìn)行純化;

  3、蛋白溶解度

  影響到蛋白溶解度的外界因素有很多,比如PH值、離子強(qiáng)度、溫度等,都會(huì)在一定程度上影響到蛋白的溶解度。所以,通過(guò)調(diào)節(jié)PH值、溫度等一系列的外界環(huán)境,提升蛋白濃度;

  4、疏水性

  對(duì)于不同的蛋白來(lái)說(shuō),其親疏水性是各不相同的,而后通過(guò)調(diào)整鹽水溶液濃度來(lái)析出蛋白;

  5、蛋白穩(wěn)定性

  通過(guò)對(duì)熱穩(wěn)定性以及酶解穩(wěn)定性等方面的調(diào)整,從而對(duì)蛋白進(jìn)行純化;

  蛋白純化過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些?

  1、層析柱的壽命有多久?填料的使用次數(shù)不同和條件有異,操作過(guò)程一定要規(guī)范,就能夠保證層析柱狀態(tài)最佳;

  2、柱子堵了、超壓如何處理?將柱子寫(xiě)下來(lái),結(jié)合說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作;

  3、如何去除核酸雜質(zhì)?核酸帶浮點(diǎn),可以通過(guò)陽(yáng)離子柱上流,從而有效去除核酸;

  4、柱子進(jìn)氣泡了怎么辦?一般來(lái)說(shuō)是因?yàn)闇囟茸兓?,我們可以用離子水或乙醇反響高速?zèng)_洗;

  5、柱子有色素如何去除?結(jié)合填料的耐受情況,優(yōu)先選擇NaOH進(jìn)行清洗,也可以使用有機(jī)溶劑清洗,在嘗試酸,如果依然去除不掉,也可以選擇定期更換填料;

  總的來(lái)說(shuō),蛋白純化的操作相對(duì)來(lái)說(shuō)也沒(méi)那么困難,結(jié)合蛋白特性,在結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),選擇最合適的蛋白純化方法。在純化的過(guò)程中,做好相應(yīng)的細(xì)節(jié)過(guò)程,這樣才能獲得更加優(yōu)質(zhì)的蛋白產(chǎn)品。普健生物專業(yè)為您提供蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。

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