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盤(pán)點(diǎn)蛋白純化的一些常用方法及步驟

發(fā)表時(shí)間:2023-11-08 訪問(wèn)次數(shù):818

  蛋白純化是實(shí)驗(yàn)中最重要的方式之一,它不僅能提升蛋白純度,保障實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行,而且能夠提升實(shí)驗(yàn)的精度。所謂的蛋白純化其實(shí)就是依據(jù)生物學(xué)的特性(比如電荷、大小、親疏水等),選擇出合適的方法,將蛋白從混合物中分離出來(lái)。下面,普健生物和大家具體聊聊有關(guān)蛋白純化的常用方法和步驟。

  一、凝膠過(guò)濾層析法

  原理:主要通過(guò)分子的大小進(jìn)行分離,利用不同孔徑的凝膠來(lái)過(guò)濾,從而將較大和較小蛋白分離開(kāi)來(lái);

  具體步驟如下:

  1、將混合物加入到凝膠柱中;

  2、加入緩沖液對(duì)其進(jìn)行洗脫,將較大分子留下來(lái);

  3、將大小適中的蛋白保留下來(lái);

  4、而后通過(guò)添加洗脫緩沖液從凝膠柱中洗脫出來(lái);

  二、親和層析法

  原理:通過(guò)抗體親和力之間的不同來(lái)實(shí)現(xiàn)蛋白純化;

  具體步驟如下:

  1、將蛋白加入到含特異性結(jié)合配體的親和層析柱中;

  2、讓抗體與配體之間進(jìn)行結(jié)合;

  3、通過(guò)加入洗脫液將非特異性結(jié)合的組分洗脫出來(lái),實(shí)現(xiàn)蛋白純化;

  三、離子交換層析法

  原理:通過(guò)抗體分子與離子交換柱之間的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)純化;

  具體步驟如下:

  1、將混合物放入離子交換柱中;

  2、加入緩沖液進(jìn)行洗脫;

  3、通過(guò)抗體表面電荷不同,能夠保留在離子交換柱中;

  4、而后通過(guò)洗脫液將其從交換柱中洗脫出來(lái);

  四、逆向相色譜法

  原理:利用目標(biāo)抗體與逆向相色譜柱中親疏水基團(tuán)之間的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)純化;

  具體步驟如下:

  1、將混合物加入到平衡好的逆向相色譜柱中;

  2、加入緩沖液進(jìn)行洗脫,讓疏水性較低的分子無(wú)法通過(guò)逆向相色譜柱中;

  3、因?yàn)橛H疏水性不同,使得其保留在逆向相色譜柱中;

  4、通過(guò)PH值、酸堿度等不同,將目標(biāo)抗體從色譜柱中洗脫出來(lái);

  其實(shí)大家不難看出,抗體純化在步驟上其實(shí)并不存在太大的區(qū)別,只是在吸附柱以及洗脫液上面有著一定的區(qū)別,需要根據(jù)具體條件來(lái)具體調(diào)整。當(dāng)然了,也需要有一定的技術(shù)支持。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。

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